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產(chǎn)品中心

產(chǎn)品詳情

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產(chǎn)品名稱： HotStart Taq Plus DNA Polymerase(含預混Mg2+的10×Taq Plus Buffer)
產(chǎn)品型號： 500 U,2.5 U/ul
產(chǎn)品廠商：通蔚生物
產(chǎn)品價格：897
產(chǎn)品庫存：113
產(chǎn)品文檔：

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簡單介紹：

HotStart Taq Plus DNA Polymerase(含預混Mg2+的10×Taq Plus Buffer)Taq Plus DNA Polymerase 是從克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導表達后分離純化的，其分子量為 94 KD，經(jīng)與 Pfu 按一定比例混合而成，該酶可增強擴增的保真性，大大增強擴增的特異性和擴增效率。Hotstart Taq Plus DNAPolymerase 是抗體修飾熱啟動酶，具有 5’-3’DNA 聚合酶活性和5’-3’外切核酸酶活性，無3’-5’外切酶活性。在 PCR 中，該酶延伸速度為 2-3kb/min，產(chǎn)物3’端帶A，可直接用TA載體克隆。一般用于 DNA 片段的 PCR 擴增、DNA 標記、引物延伸、序列測定等.

詳情介紹：

HotStart Taq Plus DNA polymerase(含預混Mg2+的10×Taq Plus Buffer）
產(chǎn)品特點

Taq Plus DNA Polymerase 是從克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導表達后分離純化的，其分子量為 94 KD，經(jīng)與 Pfu 按一定比例混合而成，該酶可增強擴增的保真性，大大增強擴增的特異性和擴增效率。Hotstart Taq Plus DNAPolymerase 是抗體修飾熱啟動酶，具有 5’-3’DNA 聚合酶活性和5’-3’外切核酸酶活性，無3’-5’外切酶活性。在 PCR 中，該酶延伸速度為 2-3kb/min，產(chǎn)物3’端帶A，可直接用TA載體克隆。一般用于 DNA 片段的 PCR 擴增、DNA 標記、引物延伸、序列測定等。

成分規(guī)格

產(chǎn)品組成	規(guī)格
HotStart Taq DNA polymerase	250Ｕ/ 2.5U/μl
10 × Taq Plus Buffer（含 Mg2+）	1m / 2*1 ml
-20℃，有效期 1 年
本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于其它用途

使用方法

（注意：以下舉例為常規(guī)PCR反應體系和反應條件，實際操作中應根據(jù)模板、引物結構和目的片段大小不同進行相應的調整和優(yōu)化）

1. PCR 體系：

推薦體系（50μl）

試劑	用量
模板 DNA	< 1μg
10 × Taq Buffer	5μl
dNTP Mixture(2.5 mM each)	4μl
Primer 1 (10 μM)	2μl
Primer 2 (10 μM)	2μl
Hotstart t Taq Plus DNA Polymerase (2.5 U/μl)	0.5 ~ 1μl
ddH2O	Up to 50μl

注意：

A 引物濃度請以終濃度 0.1-1.0μM 作為設定范圍的參考。擴增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應時，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應體系。

B 鎂離子濃度請以終濃度 1.5-3mM 作為設定范圍的參考?？筛鶕?jù)不同的引物對和模板來調節(jié)鎂離子濃度，由此優(yōu)化反應體系）

2. PCR 程序

過程		溫度	時間
預變性		94℃	5min
25－35cycles	變性	94℃	30sec
	退火	55－65℃	30sec
	延伸	72℃	1kb/30sec
	終延伸	72℃	5min

注意：

A 一般實驗中退火溫度比擴增引物的熔解溫度 Tm 低 5℃，無法得到理想的擴增效率時，適當降低退火溫度；發(fā)生非特異性反應時，提高退火溫度，由此優(yōu)化反應條件。

b 延伸時間應根據(jù)所擴增片段大小設定，Hotstart Taq Plus DNA Polymerase 的擴增效率為 1 kb/20-30 sec。

C 可根據(jù)擴增產(chǎn)物的下游應用設定循環(huán)數(shù)。如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，錯配機率會增加，非特異性背景嚴重。所以，在保證產(chǎn)物得率的前提下，應盡量減少循環(huán)次數(shù)）

3. 結果檢測：

反應結束后取 5 μl 反應產(chǎn)物，加入適量上樣緩沖液后進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。

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